如何构建一个基因的过表达载体

1. 首先需运用特定的限制酶来切割质粒，让质粒形成一个缺口，进而暴露出黏性末端。

2. 采用相同的限制酶切断目的基因，使之产生相同的黏性末端。

3. 把切下的目的基因片段置入质粒的切口位置，起初通过碱基互补配对实现结合，两个黏性末端彼此吻合，碱基间形成氢键。

4. 接着添加适量的 DNA 连接酶，促使两条 DNA 链之间构建磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，构成一个重组 DNA 分子。例如，人的胰岛素基因正是通过此类方式与大肠杆菌中的质粒 DNA 分子相结合，形成重组 DNA 分子。